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細胞凍存原理
日期:2024-08-19 15:17
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摘要:
當細胞所處溫度低于0°C時(shí),細胞脫水,細胞中可溶性物質(zhì)濃度升高,并在細胞內形成冰晶,冰晶的大小對細胞的影響是不同的,大冰晶容易造成細胞膜、細胞器的損傷和破裂,故造成復蘇出來(lái)的細胞存活率、狀態(tài)等與凍存前的狀態(tài)相差甚遠。因此,我們在凍存細胞的時(shí)候會(huì )采取兩個(gè)措施,一加入低溫保護劑,二慢凍細胞。
凍存時(shí)機:細胞應在生長(cháng)良好、密度約為 80-90%、數目一般為 10 6 -10 7 /ml,活力差的細胞在凍存后的成活率很小。
低溫保護劑:常用的低溫保護劑是二甲基亞砜DMSO,它是一種...
當細胞所處溫度低于0°C時(shí),細胞脫水,細胞中可溶性物質(zhì)濃度升高,并在細胞內形成冰晶,冰晶的大小對細胞的影響是不同的,大冰晶容易造成細胞膜、細胞器的損傷和破裂,故造成復蘇出來(lái)的細胞存活率、狀態(tài)等與凍存前的狀態(tài)相差甚遠。因此,我們在凍存細胞的時(shí)候會(huì )采取兩個(gè)措施,一加入低溫保護劑,二慢凍細胞。
凍存時(shí)機:細胞應在生長(cháng)良好、密度約為 80-90%、數目一般為 10 6 -10 7 /ml,活力差的細胞在凍存后的成活率很小。
低溫保護劑:常用的低溫保護劑是二甲基亞砜DMSO,它是一種滲透保護劑,可迅速透入細胞,提高細胞膜對水的通透性,降低冰點(diǎn),延緩凍結過(guò)程,能使細胞內水分在凍結前透出細胞外,在胞外形成冰晶,減少胞內冰晶,從而減少冰晶對細胞的損傷。
慢凍細胞:可以使用程序性降溫盒,緩慢凍存細胞,可使細胞內避免產(chǎn)生大的冰晶。如果沒(méi)有程序降溫盒,可以將凍存細胞依次放于4度1h,-20度2h,-80過(guò)夜,大部分細胞也可以適應。
凍存液配置:凍存液應該提前配制,置于室溫備用,防止臨時(shí)配制產(chǎn)生的熱量損傷細胞(DMSO加入到培養基中會(huì )放熱),凍存液常規配比為培養基:血清:DMSO=7:2:1,如果細胞比較珍貴,可以調整為血清:DMSO=9:1。